組織研磨機對酵母菌研磨破壁方法

組織研磨機對酵母菌研磨破壁方法

實驗目的
       對大量和小量酵母菌分別進行研磨，進而提取其核酸或蛋白。
 
實驗原理
       通過研磨珠的撞擊，充分破碎酵母菌細胞壁，使其內容物流出，進而提取目標成分。
 
實驗材料和器具
樣品：酵母菌
儀器：全自動樣品冷凍研磨儀（上海凈信，Tissuelyser-24）
耗材：離心管，不銹鋼研磨珠（上海凈信，中號研磨珠）
 
實驗步驟
方法1  大量酵母菌的研磨方法
1.1 預處理研磨罐和研磨珠，然后放入液氮中冷卻待用。
1.2 把酵母菌樣本一顆一顆滴到干凈的液氮中，使樣本單個個體呈黃豆粒大小；
1.3 用鑷子把這一顆顆如黃豆大小的酵母菌團夾到一個干凈的燒杯或者其他容器內；
1.4 把1.3中樣本一起倒入冷凍待用的研磨罐中，加入一顆中號珠子，不用太大也可；
1.5 把裝好樣本的研磨罐裝入凈信全自動樣品研磨機上，設置頻率11單位頻振，20s，分5-6次研磨，每次間隔都把研磨罐放入液氮中冷卻；
1.6 根據實驗需求進行后續實驗。
 
方法2  少量酵母菌的研磨方法
2.1 直接把樣本加入裝有半管玻璃細珠的離心管中；
2.2 把裝好樣本的離心管放入凈信全自動樣本研磨機上，頻率13單位頻振下研磨30s，休息10s，再在頻率13單位頻振下研磨30s，切勿連續研磨60s，否則導致升溫將影響提取效果；
2.3 把研磨好的樣本直接加入提取液，繼續后續實驗。
 
實驗注意事項
1.少量酵母菌研磨好后，實驗室需要檢驗離心管中酵母是否研磨達到要求，可以采用重疊離心管離心方法：具體步驟為，取一管研磨好裝有酵母的離心管，在底部用針或者其他尖銳東西扎一小孔，再在該離心管底部套一新離心管，一起離心。zui后將新離心管中得到的酵母液進行鏡檢，若鏡檢無完整酵母細胞，則研磨效果達到要求。
2.如果上述步驟檢測效果不理想，可以在*步裝樣本前，先把酵母樣本放入離心機，稍微離心，去除上浮液，再繼續實驗。